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le test d'oxydase détecte la présence d'un système de cytochrome oxydase qui catalysera le transport d'électrons entre les donneurs d'électrons dans les bactéries et un colorant redox – tétraméthyl-p-phénylène-diamine. Teste d’oxydase - : Résultats et discussion. Le colorant est réduit à une couleur violet foncé., Ce test est utilisé pour aider à l'identification de Pseudomonas, Neisseria, Alcaligens, Aeromonas, Campylobacter, Vibrio, Brucella et Pasteurella, qui produisent tous l'enzyme cytochrome oxydase. Un certain nombre de réactifs peuvent être utilisés pour ce test., Kovacs Oxidase Reagent: 1% tetra-methyl-p-phenylenediamine dihydrochloride, in water Gordon and McLeod's Reagent: 1% dimethyl-p-phenylenediamine dihydrochloride, in water Gaby and Hadley (indophenol oxidase) Reagent: 1% α-naphthol in 95% ethanol 1% p-aminodimethylaniline HCL Principle of Oxidase Test Cytochrome containing organisms produce an intracellular oxidase enzyme. This oxidase enzyme catalyzes the oxidation of cytochrome c., Les organismes qui contiennent du cytochrome c dans le cadre de leur chaîne respiratoire sont oxydase-positifs et virent le réactif bleu/violet.
Les microorganismes sont retardés oxydase positive lorsque la couleur passe au violet dans les 2 à 3 minutes. Les microorganismes sont oxydases négatives si la couleur ne change pas. interprétation du résultat du Test D'oxydase résultat positif Le développement d'une couleur bleu-violet foncé / bleu indique la production d'oxydase en 5 à 10 Secondes.
Si c'est négatif la surface reste incolore. -La dégradation du L-tryptophane par les bactéries appelées « TDA+ » (pour Tryptophane désaminase) entraîne la production d'acide indole-pyruvique, qu'on détecte par une goutte de réactif TDA: si positif, cela entraîne une coloration marron. Mode opératoire: -mettre environ 1mL de milieu urée-indole dans un tube stérile. - Mettre plusieurs colonies dans le tube (bien charger). Test à l oxidase . - Incuber 2 heures à 37°C. 2 heures Urease + (couleur rouge) 2 heures AVANT APRES Ajouter 4 à 5 gouttes de Kovacs ou réactif de James Indole+ (anneau rouge en surface) AVANT APRES DISQUES D'ONPG (Biomerieux 55601) Explication: Les disques d'ONPG servent à détecter les germes fermentant le lactose. La fermentation du lactose est un test important pour l'identification bactérienne. Les bactéries fermentant le lactose possèdent une enzyme appelée la b -Galactosidase: elle hydrolyse le lactose en galactose + dextrose. La b -Galactosidase peut également hydrolyser un autre substrat, l'ONPG (pour orthonitrophenyl- b -D-Galactopyranoside).
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